1、色谱纯、分析纯、化学纯之间的区别

    色谱纯试剂是指进行色谱分析时使用的标准试剂，在色谱条件下只出现指定化合物的峰，不出现杂质峰。化学纯试剂是指一般化学试验用的试剂，有较少的杂质，不妨您的实验要求。分析纯是指做分析测定用的试剂，杂质更少，不妨碍分析测定。 色谱纯、分析纯、化学纯，是指试剂的纯度级别,三种试剂所使用的标签也有所不同：化学纯试剂标签为兰色,分析纯试剂标签为红色,色谱纯试剂标签为绿色。对于化学纯，分析纯，优级纯，不同的药品要求不一样。

    2、什么是色谱法

    是一种利用混合物中诸组分在两相间的分配原理以获得分离的方法。色谱法利用不同物质在不同相态的选择性分配，以固定相对流动相中的混合物进行洗脱，混合物中不同的物质会以不同的速度沿固定相移动，最终达到分离的效果。色谱法起源于20世纪初，1950年代之后飞速发展，并发展出一个独立的三级学科-色谱学。历史上曾经先后有两位化学家因为在色谱领域的突出贡献而获得诺贝尔化学奖，此外色谱分析方法还在12项获得诺贝尔化学奖的研究工作中起到关键作用。

    3、什么叫高效液相色谱法

    高效液相色谱法(High Performance Liquid Chromatography，HPLC)又称“高压液相色谱”、“高速液相色谱”、“高分离度液相色谱”、“近代柱色谱”等。高效液相色谱是色谱法的一个重要分支，以液体为流动相，采用高压输液系统，将具有不同极性的单一溶剂或不同比例的混合溶剂、缓冲液等流动相泵入装有固定相的色谱柱，在柱内各成分被分离后，进入检测器进行检测，从而实现对试样的分析。该方法已成为化学、医学、工业、农学、商检和法检等学科领域中重要的分离分析技术

    4、高效液相色谱和气相色谱的异同点

    不同点：

    一、流动相不同：HPLC为液体流动相，GC为永久性气体作流动相(通常叫做载气)

    二、进样器不同：高效液相为平头进样针，气相色谱为尖头进样针

    三、色谱柱长不同：

    (1) 气相色谱柱通常几米到几十米(气相色谱由于载气的相对分析量较低，分子间隙大，故粘度低，流动性好，组分在气相中流动速度快，因此可以增加柱长，以提高柱效)。

    (2) 液相色谱柱通常为几十到几百毫米

    四、分析种类有差异：

    气相色谱分析的对象多为(不适绝对)：分子质量小于1000，低沸点，易挥发，热稳定性好的化合物。

    液相色谱：更适用于分析高沸点，难挥发，热稳定性差，分子质量较大(1000～2000)的液体化合物。

    五：样品柱前变化不同：

    气相色谱的样品在柱前必须变为气体(气化室汽化)，而液相色谱的样品在柱前则无变化。

    六、所用检测器有差异：

    液相主要为：紫外检测器，荧光检测器、示差折光检测器.....

    气相色谱主要为：氢火焰离子化检测器(FID)，热导检测器(TCD)，电子捕获检测器(ECD)，火焰光度检测器(FPD)，氮磷检测器(NPD)

    相同点：基本原理相同。

    都是利用物质在流动相和固定相中的分配系数的差别，从而在两相间反复多次(1000-1000000次，甚至更多)的分配，使原来分配系数差别很小的各组分分离开来。

    5、做高效液相色谱时应注意哪些问题

    (1) 色谱柱中的流动相是否会会排干的问题：

    不少做色谱分离试验的人遇到过这样的情形：不慎未及时补充流动相，泵将溶剂瓶中的流动相吸干了，HPLC系统由此而停止工作了。如此情况是否会损坏色谱柱？泵是否已将色谱柱中所有流动相都排干了？色谱柱还能使用吗？事实上，如果泵将溶剂瓶中的流动相吸干，并不会造成色谱柱的损坏。即使泵中充满了空气，泵也不会将空气排入色谱柱。因为泵只能输送液体，而不能输送空气。

    (2) 色谱柱变干的问题：

    另一个更可能发生的情况是忘记盖上色谱柱两端的密封盖或盖子太松而使色谱柱变干。同样，整个色谱柱干涸的情况不太容易发生，多半可能只是色谱柱两端的几个毫米变干了，因挥发掉所有溶剂是色谱柱变干需要相当长的时间。即使色谱柱真的变干了，也不一定就不可救药了。可以尝试用一种完全脱气的、表面张力低的溶剂(如经氦气脱气的甲醇)冲洗色谱柱以除去气体。较低的表面张力有助于浸润填料表面；已脱气的溶剂应该能够溶解并去除滞留在填料中的气体。色谱柱大约需要(以1mL/min的流速)冲一个小时或更多的时间被彻底浸润，恢复到正常状态。

    (3) 使用PEEK(polyetheretherketone)管路和接头需要注意以下问题：

    如果经常需要改变流路或更换不同品牌的色谱柱，使用PEEK材料制成的管路和接头会非常方便。PEEK管路容易连接；PEEK接头不仅无需工具，手拧即可固定，而且容易调节锥箍之外的管路长度，方便与不同品牌或规格的色谱柱相连接。

    使用此类材料的管路需要注意的是：PEEK对卤代烷烃和四氢呋喃的兼容性不好。虽然未观察到上述溶剂溶解PEEK材料的明显迹象，但PEEK遇到上述溶剂会变脆。另一个西药考虑的因素是压力限。不锈钢管可耐受6000psi的压力，但PEEK管只能耐受近4000psi(但多数HPLC应用系统压力不会超过3000psi)。

    使用PEEK接头时则无需担心接头耐溶剂性能，因为接头几乎或很少与溶剂直接接触。但手拧固定的PEEK接头压力限低于不锈钢管，因而压力太高时，可能会使接头在管路上滑动而产生死体积或漏液。

    (4) 预防液相泵的故障：

    处于良好操作状态的泵，应该能使色谱图上的基线平稳；保留时间的重复性好。在等度洗脱时压力波动小于2%。梯度洗脱时压力变化应是缓慢和平稳的。要保持泵的良好操作性能，必须维护系统的清洁，保证溶剂和试剂的质量，对流动相进行过滤和脱气。下面列出预防泵故障的几项措施：

    1) 用高质量试剂和HPLC级溶剂；

    2) 过滤流动相和溶剂；

    3) 脱气；

    4) 每天开始使用时放空排气，工作结束后从泵中洗去缓冲液；

    5) 不让水或腐蚀性溶剂滞留泵中；

    6) 定期更换垫圈；

    7) 需要时加润滑油；

    8) 查阅有关泵操作手册中的其它建议。

    9) 为了使故障发生后尽快排除，平时应常备密封、单向阀(入口与出口)、泵头装置、各式接头、保险丝等部件，以及更换工具。

    6、正相色谱法

    正相色谱法(normal phase chromatography)固定相极性大于流动相极性的分配色谱法称为正相分配色谱法，简称为正相色谱法。氰基键合硅胶、氨基键合硅胶等极性的化学键合固定相是正相色谱常用的固定相，正相色谱的流动相一般为极性较小的有机溶剂。在正相色谱中，极性小的组分由于K值较小先流出，极性较大的组分后流出。正相色谱法用于溶于有机溶剂的极性及中等极性的分子型物质的分离。

    7、反相色谱法

    反相色谱法(reversed phase chromatography)流动相极性大于固定相极性的分配色谱法称为反相分配色谱法，简称为反相色谱法。反相色谱法使用非极性固定相，最常用的非极性固定相是十八烷基硅烷键合硅胶，还有辛烷基硅烷键合硅胶等。流动相常用水与甲醇、乙腈或四氢呋喃的混合溶剂。在反相色谱中极大的组分因K值较小先流出色谱柱，极性较小的组分后流出。流动相中有机溶剂的比例增加，流动相极性减小，洗脱力增强。反相色谱法是目前应用最广的高效液相色谱法。

    8、梯度洗脱的优点

    梯度洗脱的优点：(1) 缩短分析周期；(2) 提高分离能力；(3) 峰型得到改善，很少拖尾；(4) 增加灵敏度。但有时引起基线漂移。