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HEK293-eGFP 人胚肾细胞-绿色荧光蛋白标记

产品编号:4186366
包装规格:1mL冻存管
产品类别:国产试剂
优惠价:立即咨询
产品价格
产品编号包装单位单价(元)交货期询价单
41863661mL冻存管询价2-5天
细胞基本属性
种属来源
组织来源胚胎肾
生长特性贴壁生长
细胞代数p3-p8
特别注意该细胞贴壁不牢,运输过程中细胞会有脱落,如细胞脱落,请离心收集,消化后重新铺瓶
背景介绍

Luciferase HEK-293细胞稳定表达萤光蛋白。该细胞株性状稳定,培养时不需要添加抗生素维持。可用作萤光蛋白活性检测中的阳性对照,也可用于活体动物成像实验。

该细胞通过慢病毒转染的方式携带GFP基因。        
HEK-293细胞是剪切过的人腺病毒5(Ad5)转染的人胚肾细胞形成的永生化细胞,HEK-293细胞包含并表达转染的Ad5基因。早期报道中指出,293 HEK-293细胞基因组中含有腺病毒5(Ad5)基因组的左侧端和右侧端的DNA,但是现在明确了只存在其左侧端的DNA。经过对Ad5的插入点的克隆测序发现,Ad5的1-4344位线性核苷酸整合入293 [HEK-293]细胞19号染色体(19q13.2)。293 [HEK-293]细胞为人类腺病毒载体扩增的宿主,可表达异常的玻连蛋白的细胞表面受体,由整合素β1亚单位和玻连蛋白受体α-v亚单位组成。
puro药筛浓度HEK293-eGFP细胞puro药筛浓度为1. 0ug/ml,培养过程中可不用再添加puro,如若担心抗性随着传代时间降低,可定期用0.5ug/ml浓度puro维持
Luciferase活性检测
生物安全等级2
细胞规格1x106cells/T25培养瓶或者1mL冻存管包装
支原体检测
保藏机构ATCC; CRL-1573 ATCC: PTA-4488 DSMZ: ACC-305 ECACC: 85120602
培养基90% DMEM+10% FBS+PS
培养条件气相:95%空气+5%二氧化碳;温度:37℃
冻存条件无血清冻存液,液氮储存
细胞货期现货,1周左右
运输方式复苏发货(T25瓶免运输费用)/冻存发货(需加干冰运输费用)顺丰快递
供应限制仅限于科学研究,绝不可作为动物或人类疾病的治疗产品使用
特别说明以下细胞培养冻存处理仅供参考,具体操作步骤以随货产品说明书为主
细胞培养操作
收货方式T25瓶冻存管
收货处理观察好细胞状态后,75%酒精消毒瓶壁,将T25瓶置于37度培养箱放置2-4h,以便稳定细胞状态收到细胞后,需立即转入液氮冻存或直接复苏
传代密度细胞密度达80%-90%,即可进行传代培养第三天换液并检查细胞密度
传代比例首次传代建议1:2传代
1:2传代就是1个T25瓶传2个T25瓶或者2个6cm皿。不是1个T25瓶传2个10cm皿
一管细胞建议接种到10cm培养皿或者T25瓶
传代方法

a、弃去培养上清,用不含钙、镁离子的PBS润洗细胞1-2次。          
b、加1 mL消化液(0.25%Trypsin-0.02%EDTA)于培养瓶中,使消化液浸润所有细胞,将培养瓶置于37℃培养箱中消化1 -3min(视细胞消化情况而定),然后在显微镜下观察细胞消化情况,若细胞大部分变圆并脱落,迅速拿回操作台,轻敲几下培养瓶后加2-3ml完全培养基终止消化。轻轻打匀后装入无菌离心管中,1000 rpm离心5 min,弃去上清液,补加1-2 mL培养液后吹匀。          
c、将细胞悬液按1:2比例分到新的含8 mL培养基的新皿中或者瓶中,置于培养箱中培养。

将含有1 mL细胞悬液的冻存管在 37℃水浴中迅速摇晃解冻,加4 mL培养基混合均匀。在1000 rpm条件下离心3 min,弃去上清液,加1-2 mL培养基后吹匀。然后将所有细胞悬液加入含适量培养基的培养瓶中培养过夜(或将细胞悬液加入6 cm皿中,加入约4 mL完全培养基,培养过夜)。第三天换液并检查细胞密度。
注意事项

1.运输用的培养基(灌液培养基)不能再用来培养细胞,请换用按照说明书细胞培养条件新配制的完全培养基来培养细胞。

2.因运输问题,部分细胞由于温度变化及剧烈碰撞死亡破碎形成碎片,是正常现象。

1.收货时若发现干冰化完,检查冻存管是否融化,若已融化需直接离心细胞接种观察,若未融化可以将细胞按正常步骤保存;
2.为保证细胞的高存活率,收到产品后,请立即解冻复苏细胞。
到货须知

1.收到细胞后,首先观察并拍照记录细胞瓶是否完好,培养液是否有漏液、浑浊等现象,干冰运输的细胞检查干冰是否完全挥发,细胞是否解冻,若有上述现象发生请及时和我们联系。
2.静置完成后,取出细胞培养瓶,镜检、拍照(当天以及第 2,3天请拍照),记录细胞状态 (所拍照片将作为后续服务依据);建议细胞传代培养后,定期拍照、记录细胞生长状态。

3.由于运输的原因,个别敏感细胞会出现不稳定的情况,请及时和我们联系,告知细胞的具体情况,以便我们的技术人员跟踪回访直至问题解决。
4.仔细阅读细胞说明书,了解细胞相关信息,如细胞形态、所用培养基、血清比例、所需细胞因子等,确保细胞培养条件一致,若由于培养条件不一致而导致细胞出现问题,责任由客户自行承担。

备注:客户在细胞培养过程中,有任何技术问题可以拨打技术服务,我们随时给予解答。
细胞冻存操作
冻存液配方无血清冻存液,液氮储存
细胞密度待细胞生长状态良好时,可进行细胞冻存。下面 T25瓶为例
冻存方法a、收集细胞及细胞培养液,装入无菌离心管中,1000 rpm条件下离心4 min,弃去上清液,用PBS清洗一遍,弃尽PBS,加 1 mL血清重悬细胞,进行细胞计数。
b、根据细胞数量加入无血清细胞冻存液,使细胞密度5x106~1x107/mL,轻轻混匀,每支冻存管冻存1mL细胞悬液,注意冻存管做好标识。
c、将冻存管放入-80℃冰箱,24 h后转入液氮灌储存。记录冻存管位置以便下次拿取。
注意事项冻存细胞转入液氮后及时复苏一管检查细胞冻存活性,若有异常,及时调整实验方案
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