羟自由基清除能力试剂盒
Fenton反应是最常见的产生羟自由基的化学反应，H2O2的量和 Fenton反应产生的 OH·量成正比，Fenton反应生成的羟自由基与水杨酸反应，生成物在 510nm处有特殊吸收。采用固定反应时间法，根据测试物在 510nm处吸光度值的大小来判断测试物清除羟自由基的能力。
试剂盒的组分与配制：
试剂名称 | 规格 | 保存要求 | |
试剂一 | 液体 10mL×1瓶 | 4℃保存 | |
试剂二 | 粉体×1瓶 | 4℃保存 | 临用前甩几下使试剂落入底部，再加 12mL无水乙醇，充分溶解备用。 |
试剂三 | 液体×1支 | 4℃保存 | 临用前甩几下或离心使试剂落入底部，取 60μL至新的容器中，再加 6mL蒸馏水溶解备用。 |
所需的仪器和用品：
酶标仪、96孔板、天平、水浴锅、离心机、研钵、可调式移液器、冰、蒸馏水。
羟自由基清除能力测定：
建议正式实验前选取 2个样本做预测定，了解本批样品情况，熟悉实验流程，避免实验样本和试剂浪费！
1、样本制备：
①组织样本：
称取 0.1g样本(若是干样可取 0.02-0.05g)，加入 1mL的 80%乙醇(自备)进行匀浆，匀浆后转入 2mL离心管中；于 50℃，200-300W条件下超声提取 10min(间隔 5min振荡混匀一次)。12000rpm，离心 10min，取上清，置冰上待测。
②液体样本：直接检测。若浑浊，离心后取上清检测。
2、上机检测：
①酶标仪预热 30min，调节波长至 510nm。
②不同样本清除能力不一，可先选取 2个样本做检测，若 A测定-A对照接近零，需对样本进行稀释(用提取液稀释即可)后再检测，或降低样本加样量(如减至 20μL，蒸馏水相应增加)。
③在 EP管中依次加入：
试剂名称(μL) | 测定管 | 对照 | 空白(仅做一次) |
试剂一 | 50 | 50 | 50 |
试剂二 | 50 | 50 | 50 |
样本 | 50 | 50 | |
蒸馏水 | 200 | 250 | 250 |
试剂三 | 50 | 50 | |
混匀，37℃反应 20min(准确时间)，取 200μL转移至 96孔板内，立即于 510nm处读取各管吸光值 A。 | |||
结果计算：
羟自由基清除率(%)=[A空白-(A测定-A对照)]÷A空白×100%
